抗體（antibody）指機(jī)體的免疫系統(tǒng)在抗原刺激下，由B淋巴細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白。1890年人類(lèi)第一次利用血清注射治療疾病獲得成功，為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)開(kāi)創(chuàng)了一條新路，后來(lái)人類(lèi)研究發(fā)現(xiàn)其有效成分為抗體，抗體技術(shù)的發(fā)展經(jīng)歷了以下四個(gè)階段：

第一代：雜交瘤單克隆抗體技術(shù)

第二代：嵌合抗體和人源化改造單克隆抗體技術(shù)；

第三代：全人源單克隆抗體技術(shù)；

第四代：天然全人源單克隆抗體技術(shù)；

不同抗體技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)比較

本文對(duì)四代抗體技術(shù)的發(fā)展歷程和優(yōu)缺點(diǎn)做進(jìn)一步介紹。

雜交瘤單克隆抗體

1975年，英國(guó)科學(xué)家Milstein和Kohler[1]發(fā)明了雜交瘤單克隆抗體技術(shù)，將小鼠脾臟中的B淋巴細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合后得到的雜交細(xì)胞具有兩種親本細(xì)胞的特性，獲得既能夠分泌抗體又能夠無(wú)限傳代的雜交瘤細(xì)胞。

雜交瘤技術(shù)所產(chǎn)生的鼠單抗會(huì)引起人體明顯的副反應(yīng)。主要表現(xiàn)在鼠抗體的FC不能激活人的效應(yīng)系統(tǒng)，如抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）和補(bǔ)體依賴(lài)的細(xì)胞毒作用（CDC）；鼠抗體作為異源蛋白進(jìn)入人體，會(huì)激發(fā)人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生人抗小鼠抗體（HAMA）；異源蛋白在人體內(nèi)清除很快，抗體半衰期短等。

嵌合抗體和人源化改造單克隆抗體技術(shù)

嵌合抗體（ChimericAntibodies）是由動(dòng)物源性抗體的V區(qū)基因與人源抗體的C區(qū)基因拼接為嵌合基因，使抗體的70%成分都是人成分，然后插入載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞生產(chǎn)抗體[2-3]。人源化改造單克隆抗體(HumanizedAntibodies)是將動(dòng)物源性抗體的CDR或者SDR[4]移植到人源抗體的骨架上，使抗體的90%成分都是人成分，人源化抗體可降低抗體的免疫原性，延長(zhǎng)抗體藥物半衰期[5-6]。

無(wú)論嵌合抗體還是人源化抗體，其序列中依然存在動(dòng)物源成分，依然會(huì)引起機(jī)體的免疫排斥，導(dǎo)致抗抗體的產(chǎn)生及藥物療效的大大降低。

全人源抗體

全人源抗體(all-HumanAntibodies)，是指組成抗體的氨基酸序列100%是來(lái)自于人的抗體。全人源抗體相比前面兩種抗體來(lái)講，免疫原性大大降低，安全性得到了很大的提高。目前主要的全人源抗體技術(shù)包括抗體庫(kù)展示技術(shù)和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)。

庫(kù)展示技術(shù)平臺(tái)，目前工業(yè)界發(fā)展較為成熟是噬菌體庫(kù)展示技術(shù)[7]，是將抗體基因序列插入到噬菌體外殼蛋白結(jié)構(gòu)基因中，使抗體基因隨外殼蛋白的表達(dá)而表達(dá)（圖1）。CAT公司的全球首個(gè)全人源抗體Humira來(lái)自噬菌體展示技術(shù)，先篩選和靶抗原高效結(jié)合的抗體重鏈的可變區(qū)，再篩選和靶抗原高效結(jié)合的抗體輕鏈的可變區(qū)，將結(jié)合最好的抗體輕鏈重鏈重組表達(dá)成一個(gè)完整的抗體[8,9]。特點(diǎn)：人源成分100%，免疫原性大大降低，但其抗體輕鏈和重鏈可能存在不配對(duì)問(wèn)題，并且抗體沒(méi)有經(jīng)過(guò)人體環(huán)境免疫耐受的選擇。

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)是將人類(lèi)抗體重鏈和輕鏈的基因引入抗體基因缺陷的小鼠，使之擁有人類(lèi)抗體基因，用抗原免疫該小鼠而獲得全人源抗體[10]，主要的研發(fā)企業(yè)包括Medarex、Abgenix、Regeneron、OMT、Kymab、TRIANNI,Inc.和Ablexis,LLC等。特點(diǎn)：人源成分100%，免疫原性大大降低，其缺點(diǎn)是所產(chǎn)生的抗體在小鼠體內(nèi)成熟，沒(méi)有經(jīng)過(guò)人體環(huán)境免疫耐受的選擇，實(shí)際上是一種“鼠源化”人單克隆抗體，所以依然存在安全隱患。

天然全人源單克隆抗體技術(shù)

天然全人源抗體（Naturalall-Humanantibodies），是指抗體就是來(lái)自于天然的人的B細(xì)胞。天然全人源抗體主要技術(shù)包括人骨髓瘤細(xì)胞技術(shù)、B細(xì)胞永生化技術(shù)（EBV轉(zhuǎn)化B細(xì)胞克隆及其他細(xì)胞因子輔助B細(xì)胞克?。?、單個(gè)B細(xì)胞RT-PCR及單個(gè)B細(xì)胞測(cè)序等技術(shù)，這類(lèi)技術(shù)是以從人體上的B細(xì)胞為起始點(diǎn)，最后得到單個(gè)B細(xì)胞所表達(dá)的有用的抗體。近年來(lái)以人單個(gè)B細(xì)胞克隆技術(shù)平臺(tái)為代表的第四代抗體技術(shù)嶄露頭角，盡管仍然存在各種各樣的問(wèn)題，但是該技術(shù)領(lǐng)域正在發(fā)生日新月異的變化。如百健利用單個(gè)B細(xì)胞RT-PCR方法開(kāi)發(fā)的天然全人源Aducanumab[11-12]，靶向寡聚的Amyloid-β，有望成為首個(gè)可以逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默癥進(jìn)程的藥物。

目前國(guó)內(nèi)外掌握天然全人源單克隆抗體技術(shù)的公司有Aridis、iRepertoire、AIMM、Xbiotech、Humabs（VirBiotechnology子公司）、Neurimmune和Trinomab(中國(guó),珠海)等幾家公司，其各自特點(diǎn)如表1所示：

Aridis公司的MabIgX-C技術(shù)

通過(guò)與其專(zhuān)利保護(hù)的骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，開(kāi)發(fā)周期較長(zhǎng)，操作較繁瑣，效率較低下

單個(gè)B淋巴細(xì)胞的多重PCR，再結(jié)合NGS技術(shù)分離天然全人源抗體，開(kāi)發(fā)成本較高

通過(guò)其專(zhuān)利保護(hù)兩種細(xì)胞因子BCL6和Bcl-xL引入記憶B細(xì)胞實(shí)現(xiàn)永生化，開(kāi)發(fā)周期較漫長(zhǎng)，操作較繁瑣，技術(shù)較為復(fù)雜

HUMABS公司（VirBiotechnology子公司）的CellClone技術(shù)

運(yùn)用TLR和IL-6兩種細(xì)胞因子及EBV病毒使B細(xì)胞永生化，結(jié)合RT-PCR技術(shù)篩選抗體，開(kāi)發(fā)周期較長(zhǎng)

Xbiotech公司的TrueHuman?技術(shù)，Neurimmune公司的RTM?技術(shù)

利用傳統(tǒng)基因克隆從人的PMBC細(xì)胞中分離出抗體基因，再進(jìn)行重組，開(kāi)發(fā)周期較漫長(zhǎng)，操作較繁瑣

利用分選的單個(gè)漿細(xì)胞或抗原特異性B細(xì)胞RT-PCR技術(shù)，結(jié)合線性化克隆技術(shù)，高效快速分離天然全人源抗體

泰諾麥博（Trinomab）公司的核心天然全人源單克隆抗體技術(shù)平臺(tái)（HitMab?）。該技術(shù)平臺(tái)生產(chǎn)的單克隆抗體是真正的天然全人源單克隆抗體，其主要技術(shù)路線如圖2所示：收集志愿者PBMC，通過(guò)流式分選單個(gè)B細(xì)胞，進(jìn)行單個(gè)B細(xì)胞培養(yǎng)，構(gòu)建線性表達(dá)系統(tǒng)，最后對(duì)重組抗體進(jìn)行驗(yàn)證。整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程實(shí)現(xiàn)了“高通量”、“高效率”和“可操作”，可快速獲得有效的天然全人源單克隆抗體。

天然全人源單克隆抗體的主要特點(diǎn)：不僅基因序列100%是人的，而且其親和力和特異性是經(jīng)過(guò)人體的免疫耐受環(huán)境下選擇而成熟的，以人免疫耐受為指導(dǎo)進(jìn)行表位選擇，理論上對(duì)人體自身無(wú)免疫原性，抗體重鏈和輕鏈?zhǔn)翘烊辉鋵?duì)組合，稱(chēng)之為天然全人源抗體。毫無(wú)疑問(wèn)，天然全人源抗體，將在臨床應(yīng)用上給予患者最大的安全性保證。