癌癥特異性單克隆抗體是抗癌療法研發(fā)歷史中最成功的藥物之一。癌癥特異性抗體不僅可以作為單獨的活性藥物作用于靶向癌細胞，也可以作為運輸機器將藥物運送到特定的位點。然而目前已知的癌癥特異性靶點還知之甚少，許多癌癥靶點還在研究中。

　　根據(jù)已有的信息，目前市場上一共有19種癌癥抗體類藥物，其中兩種已經(jīng)在今年1月份進入了首次常規(guī)檢查程序。這19種單抗中有7種針對血液惡性腫瘤，12種用于治療實體瘤。前者針對的靶點蛋白有四類，分別是：CD19,CD20,CD30以及CCR4，后者中有六種抗體直接針對癌細胞表面分子（主要是EGF-R與HER2），而剩下的單抗主要用于喚醒宿主的癌癥特異性免疫反應，比如CTLA-4以及PD-1抗體，以及抑制癌癥的血管生成，比如VEGF抗體?？傊?，目前得到批準的癌癥單克隆抗體覆蓋面太窄，而且特異性也不夠強。

　　這一不足或許是由于目前的靶點篩選方法導致的。比如通過尋找癌組織與正常組織中DNA，RNA以及蛋白質的差異尋找合適的靶點。目前我們極大地依賴于體外的癌細胞系或者臨床樣本進行靶點的篩選，然而體外的癌細胞系與體內(nèi)環(huán)境中的腫瘤在很多表面分子的表達水平方面是存在明顯差異的，而這些差異我們并不十分清楚；臨床樣本雖然可以提供相對真實的信息，但無奈數(shù)量太少，我們無法依靠其進行常規(guī)的篩選實驗。

　　此外，在高通量基因組學與蛋白組學研究中，一系列前期步驟極大地破壞了原本癌細胞的組織結構。雖然在體外檢測中我們必須放棄腫瘤的復雜結構才能獲得分子水平的信息，然而這些結構反映了腫瘤在體內(nèi)的真實環(huán)境。腫瘤是一類復雜的組織結構，除了癌細胞本身之外，還包括多種非癌細胞，比如表皮細胞，內(nèi)皮細胞，免疫細胞等。另外，還有許多可溶性地細胞因子充斥在腫瘤的微環(huán)境中。除此之外，腫瘤內(nèi)部還有大量的血管系統(tǒng)存在，它們實際上也可以作為穩(wěn)定的腫瘤靶點進行研究（腫瘤內(nèi)部的血管，無論其結構還是功能，都是異于正常組織的。這些血管系統(tǒng)可以營造局部的高血壓，引起局部缺氧與再灌注，導致抗體的浸入受限）。然而這些信息在我們目前的方法中均被忽視了。

　　很長時間以來，研究者們均花費大量時間在腫瘤本身的研究，而忽視了腫瘤的微環(huán)境，最近這一現(xiàn)象得到了改觀。很多研究開始注意腫瘤為環(huán)境對腫瘤生長的影響。

　　針對目前圍繞腫瘤微環(huán)境設計的特異性抗體身份有限，作者提出了一些基于抗體展示技術的新型研究手段，或許可以幫助我們加快研發(fā)的速度。

　　新型噬菌體-抗體篩選技術

　　目前已經(jīng)有一些人源抗體庫構建出來，體外篩選某一特定純化抗原的抗體十分簡便：只需幾輪的親和選擇便可以得到。通過優(yōu)化篩選條件還可以增強篩選效果。雖然抗體的天然屬性無法獲得，但體外篩選條件卻可以得到精確調控。比如可以設計一段特定的抗原構象篩選得到特異性的抗原物質，又或者可以加入一段競爭性的抗原去除不想要的抗體類型。體外篩選技術可以克服體內(nèi)自然形成過程中出現(xiàn)的免疫耐受現(xiàn)象，得到針對高保守的抗原或者自體抗原的抗體。

　　然而，抗體的實際選擇過程要更為復雜一些。其中包括篩選針對整個細胞的抗體群，其中目標靶點只是細胞所有表位的一部分，而且需要對異源的細胞群進行統(tǒng)一篩選。這一手段效果不明顯，原因是非特異性的噬菌體顆粒背景過高，選擇往往偏向于高表達的表位類型以及多輪篩選后富集的往往是主導型的噬菌體克隆。在報道的篩選結果中，有一多半篩選到的抗體被證明能夠與相應抗原發(fā)生特異性結合。這些抗原表位均為高表達的分子，比如EGFR，DC44，HER2等。

　　一些研究發(fā)現(xiàn)了一些新的抗原表位，他們認為需要利用新型的篩選技術找到那些低豐度的特征分子。其中包括正在開發(fā)的"表型篩選"技術等。

　　體外噬菌體篩選技術

　　組織切片法

　　當任何組織離開其原本的生長環(huán)境時，都會引起明顯的基因表達差異。因此，在利用細胞系鑒定得到腫瘤特異性分子標記應用到臨床上時要十分小心，而且我們在篩選過程中要盡可能保證腫瘤組織的原生生長環(huán)境。另外一個問題是不同的腫瘤組織具有很強的異質性，這也對靶點的篩選造成了困難。為了解決這些問題，新型的噬菌體篩選技術被開發(fā)出來。首先需要介紹的是激光捕捉微切片（lasercapturemicrodissection,LCM），這項技術能夠從與噬菌體庫共培養(yǎng)的腫瘤組織中切出一小片細胞供后續(xù)的分析。LCM方法的關鍵在于切片的制備，這直接影響到最后的篩選結果。尤其是脫水步驟，這一步驟能夠嚴重地降低噬菌體顆粒的結合。

　　研究者們開發(fā)出了能夠兼容LCM與噬菌體活性的方法，比如在LCM之后快速凍干切片保證盡可能多的噬菌體顆粒的附著。

　　影-棍法

　　對于篩選針對腫瘤微環(huán)境中稀有的細胞亞群的一個關鍵問題是噬菌體顆粒接觸受到限制。為了解決這個問題，S?rensen與Kristensen兩人開發(fā)出了針對單個細胞的抗體篩選技術。之所以稱之為"影-棍"是因為這一方法需要用到一個小圓盤粘在玻璃吸管的下方（很像曲棍球）。

　　這個裝置用于保護靶細胞在輻射殺傷過程中的影響。之后就可以順利進行噬菌體的吸附操作了。這一方法對于低豐度的細胞類型抗體篩選十分有效果。

　　體內(nèi)噬菌體篩選技術

　　噬菌體-多肽篩選法

　　體內(nèi)的噬菌體篩選技術最大的好處在于不需要破壞原有的腫瘤微環(huán)境結構。比如一類叫做avb3的整合素蛋白，它在體內(nèi)特異性高表達與腫瘤上皮細胞，而在體外的腫瘤細胞系中這一分子廣譜地高表達，因此如果僅靠體外篩選技術我們很容易錯過這個非常好的分子標記。

　　我們通過將噬菌體庫注入小鼠體內(nèi)，然后分析腫瘤組織內(nèi)部特異性附著的，同時又相對較少出現(xiàn)在其它正常組織中的噬菌體顆粒，就可以找到相應的特異性靶點分子。

　　噬菌體-抗體篩選法

　　依靠噬菌體庫表達腫瘤特異性多肽，我們還可以在體內(nèi)尋找有效的特異性抗體。

　　此外，作者還介紹了結合體內(nèi)-體外的復合式篩選技術，在此不再贅述。