【綜述】人巨細胞病毒微小RNA對病毒潛伏狀態(tài)的影響！

　　人巨細胞病毒(humancytomegalovirus，HCMV)可編碼多種成熟微小RNA(microRNA，miRNA)以調節(jié)自身及宿主基因表達，影響病毒復制并參與多種免疫逃逸機制，對于實現(xiàn)病毒的終生潛伏感染十分重要。我國HCMV感染率較高，孕婦血清IgG抗體陽性率達95%以上，母體原發(fā)感染或潛伏感染激活均可引起HCMV宮內感染，導致流產、死胎、胎兒畸形及生長發(fā)育遲緩[1，2]。先天性HCMV感染患兒大部分無明顯臨床癥狀，但仍有部分患兒后期會出現(xiàn)智力低下、感覺神經性耳聾及運動功能障礙；我國嬰幼兒HCMV感染率為60%～80%，初期的急性感染過后轉為終生潛伏狀態(tài)，當人體免疫功能低下時HCMV可再次激活，引起一系列臨床癥狀[1]?，F(xiàn)就HCMV編碼的miRNA在病毒潛伏機制中的作用進行綜述。

　　一、HCMVmiR－US25－1對潛伏感染的維持及免疫逃逸

　　Fu等[3]成功構建了HCMV潛伏感染的人單核細胞白血病THP－1細胞系，并對其miRNA進行深度測序，發(fā)現(xiàn)潛伏狀態(tài)下有8種病毒miRNA表達，其中miR－US25－1表達量最多，占總量的65.2%，提示其可能有助于潛伏狀態(tài)的建立與維持。miR－US25－1也是第一個被發(fā)現(xiàn)可與靶向序列的5’非編碼區(qū)結合以發(fā)揮抑制效應的miRNA[4]。研究發(fā)現(xiàn)，過表達miR－US25－1的人包皮成纖維細胞在感染HCMVAD169株后其病毒滴度及DNA載量均有明顯下降，同時伴有即刻早期蛋白和晚期蛋白(分別為IE72和pp65)的表達量顯著減少。由此推斷，miR－US25－1可能在感染早期階段起抑制病毒復制的作用；值得注意的是，過表達的HCMVmiR－US25－1對單純皰疹病毒和腺病毒感染時的病毒DNA合成也有顯著抑制作用，考慮到這3種病毒基因組各不相同，可認為miR－US25－1是通過抑制宿主細胞基因表達以降低某個對病毒復制至關重要的宿主蛋白產物含量，進而阻礙病毒復制[5]。

　　HCMV的主要潛伏位點是骨髓樹突狀造血祖細胞，人巨細胞病毒即刻早期啟動子(humancytomegalovirusmajorimmediateearlypromoter，MIEP)的轉錄沉默是其維持潛伏狀態(tài)的關鍵環(huán)節(jié)。研究者在正常潛伏感染者體內發(fā)現(xiàn)，MIEP可通過與抑制性染色質相互作用以維持MIEP的轉錄沉默；而樹突狀祖細胞分化為成熟樹突細胞過程中可誘導染色質重塑，使MIEP處于轉錄活性狀態(tài)，誘導即刻早期蛋白表達，最終使病毒由潛伏感染轉變?yōu)楫a毒性感染[6，7，8]。HCMV編碼的miR－US25－1可下調細胞周期蛋白及其他相關蛋白的表達，阻礙骨髓造血干細胞的細胞周期進程及分化成熟[4]，從而維持MIEP的轉錄沉默，使HCMV處于潛伏感染狀態(tài)。

　　HCMVmiR－US25－1－5p來源于miR－US25－1，可下調IE72和pp65表達以抑制病毒復制[5，6]。研究發(fā)現(xiàn)，宿主細胞的酪氨酸3－單加氧酶/色氨酸5－單加氧酶活化蛋白相關基因、泛素B相關基因、核仁磷酸蛋白1和熱休克蛋白90AA1有利于HCMVDNA合成，HCMV編碼的miR－US25－1－5p可下調其表達以抑制病毒復制[9]。此外，液泡ATP酶可維持胞內體的酸性環(huán)境，有助于HCMV侵入細胞，對病毒的復制十分重要。HCMV編碼的miR－US25－1－5P可干擾液泡ATP酶的形成，通過抑制病毒組裝及病毒粒子釋放以維持HCMV的潛伏感染狀態(tài)。同時，胞內體的酸性環(huán)境也有助于Toll樣受體信號的傳導及主要組織相容性復合體(majorhistocompatibilitycomplex，MHC)Ⅱ類分子的有效呈遞，因此，miR－US25－1－5P也有可能通過下調液泡ATP酶以干擾宿主的固有免疫及特異性免疫應答，在免疫逃逸方面發(fā)揮作用[10]。

　　二、HCMVmiR－US33對病毒復制的影響

　　HCMVmiR－US33由病毒US29基因的互補序列編碼，可抑制HCMV的產毒性復制周期，在促進及維持病毒的潛伏感染方面發(fā)揮一定作用[6]。突觸融合蛋白3(syntaxin3，STX3)為可溶性N－乙基馬來酰亞胺敏感因子偶聯(lián)蛋白質受體的一個組分，參與HCMV感染宿主細胞時的膜融合及病毒組裝過程，從而促進病毒復制，STX3損耗可影響病毒粒子形成[11]。HCMVmiR－US33－5p來源于miR－US33，可與STX3mRNA的3‘非編碼區(qū)結合，下調其表達以抑制HCMV的復制[12]。但需要注意的是，上述結論是基于HCMVmiR－US33－5p過表達的細胞模型，考慮到自然感染時相對低水平的miR－US33－5p含量及其他因素如IL－10、細胞染色質組裝因子對病毒復制的抑制作用，miR－US33－5p實際上對病毒復制的影響程度仍需進一步研究確認[7，13，14]。

　　三、HCMVmiR－UL112－1對病毒復制及潛伏感染的影響

　　HCMVmiR－UL112－1與miR－US25－1的表達模式相似，均在感染早期表達，且隨感染進程表達水平逐漸增加[15]。miR－UL112－1過表達可通過下調IE72及UL114蛋白水平以抑制病毒復制。其中，UL114蛋白具有尿嘧啶DNA糖苷酶活性，可用于DNA修復以促進病毒復制，但主要在病毒潛伏感染時發(fā)揮作用，遠不及IE72下調對病毒復制的影響[5，16]。此外，miR－UL112－1還可與宿主細胞編碼的miR－376a協(xié)同作用，抑制MHCI鏈相關基因B表達，通過削弱NK細胞的識別及殺傷作用，在免疫逃逸方面發(fā)揮作用[17]。

　　白細胞介素－32(interleukin－32，IL－32)可介導多種信號通路誘導表達IL－1β、IL－6、IL－8和腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，TNF)等細胞因子，參與固有免疫與適應性免疫應答[18，19]。感染甲型流感病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人乳頭瘤病毒和人類免疫缺陷病毒的患者，其血清IL－32水平均有升高，提示IL－32在宿主抗病毒免疫方面有重要作用[20，21，22，23，24]。對40例HCMV－IgM陽性患者和32例HCMV－IgM陰性患者的血清IL－32水平進行檢測，發(fā)現(xiàn)前者血清IL－32水平明顯高于后者。體外試驗也證明，人胚腎細胞HEK293感染HCMV后，其IL－32表達增加，但可被過表達的miR－UL112－1下調[19]。IL－32表達下調可減少細胞內TNF－α含量并對NK細胞的活化產生抑制作用[25]，這可能是HCMV利用其miRNA參與免疫逃逸機制的又一途徑。

　　四、HCMVmiR－US4－1參與免疫逃逸反應

　　宿主的特異性抗病毒機制主要由T細胞介導的細胞免疫承擔，EB病毒、卡波西肉瘤病毒和單純皰疹病毒等許多病毒都可通過干擾MHCI類抗原的呈遞以阻礙病毒抗原肽被特異性CD8＋T細胞識別；HCMV的US2－US11基因片段雖對病毒復制可有可無，但其編碼的5種糖蛋白(US2、US3、US6、US10、US11)都可干擾病毒抗原肽的呈遞過程[26，27]。內質網氨肽酶(endoplasmicreticulumaminopeptidase1，ERAP1)可加工MHCI類抗原肽前體的氨基末端使其成為成熟的抗原表位，以供CD8＋T識別[28]。人ERAP1基因產物主要有2種亞型(ERAP1a和ERAP1b)，研究發(fā)現(xiàn)，HCMV編碼的miR－US4－1可特異性作用于ERAP1b的3’非編碼區(qū)，下調其mRNA及蛋白表達以抑制病毒抗原肽的加工成熟，從而阻礙特異性細胞毒性T細胞對靶細胞的識別，最終實現(xiàn)HCMV的免疫逃逸[29]。

　　綜上所述，HCMV可通過其編碼的miRNA與宿主mRNA相互作用，抑制自身DNA合成以促進潛伏狀態(tài)的形成。同時，HCMV又利用其miRNA下調宿主細胞相關免疫蛋白的表達，通過削弱NK細胞及細胞毒性T細胞的識別和殺傷效應以逃避宿主的固有及特異性抗病毒免疫應答。隨著研究的深入，可能會有新的HCMVmiRNA被發(fā)現(xiàn)，但如何有效地鑒定出miRNA的靶向序列仍需進一步探索。HCMV作為潛伏感染病毒，其編碼的miRNA除了抑制病毒DNA合成和免疫細胞殺傷效應外，是否還參與其他機制影響病毒潛伏與活化之間的轉換尚未知曉。以HCMVmiRNA為研究切入點，更全面地研究其在HCMV致病機制和病毒潛伏－活化轉換機制中的作用，可能有助于探尋新的預防和治療方案。